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大鼠肝rRNA的提取操作方法
时间:2024-04-23编辑:金少源浏览:

操作方法

1、称取鼠肝 15g 左右,加于10 倍体积的苯酚-甲酚混合溶液以及 10 倍体积的萘 5-二磺酸溶液.在下用匀浆器匀浆

2、将匀浆液取出置于烧杯中.2℃ 搅拌 20min,于50℃,6000g 离心 15min,弃沉淀,

3、上淸液加入三异丙萘磺酸钠,至浓度为5%,再加入 1/2 体积的苯酚-甲酚溶液,于 20℃搅拌 20min,然后以 8000g, 5℃ 离心 10 min.弃沉淀

4、在每 100ml 离心上清液屮依次加入 3g 氯化钠,2g 苯甲酸钠及 10mim-甲酌。搅拌溶解均匀后,用 8000g,5℃ 离心10min。弃上清液。

5、将沉淀物按下列顺序离心洗涤:用冷的洗涤液A 洗二次,洗涤液 B、75% 乙醇溶液各洗一次,再用无水乙醇冼二次,每次均用 25ml 后得纯的鼠肝 rRNA. 取出 rRNA,置于装有 CaCl2 的真空干燥器中干燥。


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