人和动物体内绝大部分组织都可以在体外培养，但其难易程度与组织类型、分化程度、供体的年龄、原代培养方法等有直接关系。原代取材是进行组织细胞培养的第一步，也是非常关键的一步，将直接影响后续实验的正常进行。本期细胞学堂将详述取材基本要求及各类组织取材方法。

　　取材基本要求

　　取材的组织尽量在4~6h内制作成细胞。若不能及时培养，可将组织浸泡于培养液内，放置于冰浴或4℃冰箱中。如果组织块很大，应先将其切成1cm3以下的小块再低温保存，但时间不能超过24h。

　　取材时应严格无菌操作，用无菌包装的器皿或用事先消毒好的、带少许培养液（内含青、链霉素）的小瓶等便于携带的物品取材。

　　取材和原代培养时，要用锋利的器械如手术刀切碎组织，尽可能减少对细胞的机械损伤。

　　对于组织样本带有的血液、脂肪、神经组织、结缔组织和坏死组织，取材时要细心除去；分离时为避免组织干燥，可在含少量培养液的器皿中进行。

　　原代培养，特别是正常细胞的培养，应采用营养丰富的培养液，最好添加胎牛血清。

　　一般来说，胚胎组织较成熟个体的组织容易培养，分化低的较分化高的组织容易生长。

　　为了便于以后鉴别原代组织的来源和观察细胞体外培养后与原组织的差异性，原代取材时要同时留好组织学标本和电镜标本。

　　取材的基本器材和用品：

　　01

　　眼科组织弯剪、弯镊、手术刀（用前消毒）；

　　02

　　装有无血清培养基或Hanks液的小瓶；

　　03

　　小烧杯（10mL，50mL）;

　　04

　　培养皿。

　　不同组织取材方法

　　鼠胚组织的取材

　　因为小鼠的毛中隐藏微生物较多，而且不易消毒，所以取材时更要注意无菌消毒，其无菌消毒一般采用以下方法进行：

　　1

　　用引颈法杀死动物，然后将其整个浸入盛有75%乙醇的烧杯中3~5min，注意时间不能太长，以免乙醇从口和其他孔道进入体内，影响组织活力；

　　2

　　取出后放在消毒过的固定板上，用消毒过的图钉或大头针将其固定；

　　3

　　用眼科剪和止血钳剪开皮肤解剖取材。

　　也可在乙醇消毒后，在动物躯干中部环形剪开皮肤，用止血钳分别挟住两侧皮肤拉向头尾把动物反包，暴露躯干，然后再固定解剖取材。取好的组织要放置在另一干净的无菌平皿中或玻璃板上进行原代培养操作。动物消毒后的操作宜在超净台内或无菌环境中进行。

　　鸡胚组织的取材

　　一般使用鸡胚时应自行孵育。主要步骤为：精选新鲜受精鸡蛋，擦掉表面的脏物，置37℃普通温箱中孵育，箱内同时放一盛水的平皿以维持培养箱内的湿度。一般采用9-12d的鸡胚，在这期间，每天翻动鸡蛋1次。于无菌条件下，将蛋以气室（大头）向上放在1个小烧杯中，碘酒、乙醇消毒。用剪刀环形剪除气室端蛋壳，切开蛋膜，暴露出鸡胚，用钝弯头玻璃棒伸入蛋中轻轻挑起鸡胚、放入无菌培养皿中，根据需要取材。

　　皮肤和黏膜的取材

　　一般皮肤、黏膜主要取自手术过程中切除的部分组织；如特殊需要也可酌情单独取材。方法似外科取断层皮片手术的操作，但面积一般在2~3mm2即可。这样局部不留瘢痕。注意取材时不要用碘酒消毒，必要时可用高浓度抗生素溶液漂洗。

　　内脏和实体瘤的取材

　　内脏和实体瘤取材时，一定要明确和熟悉自己所需组织类型和部位，要修剪去除不需要部分如血管、神经和组织间的结缔组织；取肿瘤组织时要尽可能取肿瘤细胞分布较多的部分，避开坏死液化区域。

　　血细胞的取材

　　一般多采用静脉取血，微量时也可以从指尖或耳垂取血。为防止凝血常用肝素抗凝剂，抗凝剂的量以产生抗凝效果的最小量为宜，量过大易导致溶血。肝素常用浓度为20U/mL，抽血前针管要用浓度较高的肝素（500U/mL）湿润。抽血时要严格无菌。

　　骨髓、羊水、胸水、腹水内细胞的取材

　　这几种样品取材后一般不需要其他处理，离心后最好立即培养，不宜低温保存。