牛血清白蛋白(BSA)在动物细胞无血清培养中,起到生理和机械保护作用和载体作用。牛血清白蛋白(BSA)在生化实验中有广泛的应用。
牛血清中白蛋白(BSA)的制备方法很多,包括盐析法、有机溶剂沉淀法和热激法提取等,但目前的制备方法所得的牛血清白蛋白(BSA)收率或纯度都比较低,存在脂肪酸、蛋白酶、核酸酶以及内毒素等杂质,限制了牛血清白蛋白(BSA)的进一步应用,因此,一种高纯度从牛血清中分离白蛋白的方法十分关键。
首先向牛血清中加入生理盐水或PBS溶液将牛血清稀释;再向稀释后的牛血清中加入适量硫酸铵,2~8℃静置30min以上,离心收集上清液;
向上清液中加入2~3倍体积的PBS溶液,混匀后进行疏水层析,使用PBS溶液洗脱,收集洗脱液;
将洗脱液进行分子筛层析,收集不含盐和其它小分子的蛋白峰;所述层析填料为G10-G75葡聚糖;
使用阴离子交换层析进一步纯化牛血清白蛋白(BSA),通过0.1~1.5M浓度氯化钠进行梯度洗脱,收集精纯的牛血清白蛋白(BSA);
经过对病原微生物进行灭活、分子筛层析、超滤浓缩、过滤除菌得到纯度高于99.5%的牛血清白蛋白(BSA)。
这种方法在程度地去除血浆中的杂质,有效提高了牛血清白蛋白(BSA)的纯度,对于其在生化研究、遗传工程和医药研究的应用具有重要价值。
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