细胞培养是生物医学研究人员必须掌握的一项基本技能，是实验成功与否的关键。所以，了解细胞培养的基本操作要领，对生物医药科研工作者，特别是对基础研究工作者来说，显得尤为重要。文章从实际操作的角度谈谈体外细胞培养操作要点。

　　一、试验前的准备

　　一般细胞生长环境为5%的二氧化碳，37℃恒温及饱和湿度。在细胞培养开始之前，实验人员必须查阅资料，了解细胞培养的习惯，如贴壁、半贴壁、悬浮物等。理解细胞生长的营养条件，大多数细胞为10%胎牛血清+89%培养液+1%抗生素。培养基的种类当然很多，高糖、低糖、分化培养基、干细胞培养基等等。

　　二、细胞消化

　　与悬浮细胞相比，贴壁细胞的传代步骤较多，应避免不必要的细胞污染。传代操作可以在细胞生长集中程度达到80-90%左右的时候进行。由于细胞生长具有浓度依赖关系，过或过早传代都会影响细胞状态。取细胞培养盒， PBS清洗2次。此时将细胞培养瓶中的液体吸净，可采用真空泵、移液管、一次性吸管等，但无论采用何种吸净方法，均应避免操作手触碰瓶口而造成污染，吸头触碰细胞面而造成细胞机械损伤。将液体吸净，加入适量胰蛋白酶。胰酶不宜过多，只需少量滴在培养瓶上，倾斜培养可使细胞面覆盖。细胞可以在这个时候放置在培养箱里，37℃条件下有利于胰蛋白酶的消化。大约2分钟就可以消化了。自然地，有些细胞更容易消化，可能消化过程只需要30秒，如TC-1、MC-38等肿瘤细胞株；另一些则消化得更慢，如培养的间充质干细胞(MSCs)。

　　三、接种

　　对上述细胞沉淀物进行重悬。可借助于旋涡震荡仪进行重悬，也可在重悬细胞前用手指轻弹离心管底部，再加入适量的培养基重悬，切忌直接加入培养基后用移液枪吹干。在2-3个培养瓶中，将重悬好的细胞全部分离，补全生长培养液继续培养。约8-10毫升的培养液用于T25培养，20-25毫升的培养液用于T75培养。注射后，十字混匀，每日镜下观察细胞状况。