牛凝血酶
产品简介:
CAS 号 | 9002-04-4 |
分子量 | 37 kDa |
外观 | 白色冻干粉末或块状物 |
比活力 | >2000 IU/mg |
纯度 | SDS-PAG检测图谱无杂蛋白条带 |
pH(25℃) | 5.0~6.0 |
凝血酶(Thrombin)来源于牛血浆,分子量 37KD,是由两条肽链(31KD 和 6KD)通过二硫键组成的。凝血酶是凝血酶原(凝血因子 Ⅱ)激活后形成的蛋白质水解酶,其催化纤维蛋白原(fibrinogen)水解掉 A 肽和 B 肽,由此形成纤维蛋白单体,单体进一步聚合,在血小板、红细胞和白细胞等参与下形成血凝块。由于凝血酶具有切割序列专一性强,水解效率高的特点,它被广泛地应用于基因工程产品的开发,其应用之一是作为工具蛋白酶用于重组融合蛋白质的特异性断裂,尤其适用于生物工程制药业及基因工程、生物化学、分子生物学等研究。
使用方法:
本凝血酶是一种广泛用于切割标签的蛋白酶,能够有效切质量比仅为 1:2000 的蛋白。切割可在 20℃到 37℃之间切割 0.3 到 16h。凝血酶最佳切割位点是 X4-X3-P-R[K]-X1'-X2',这里 X4 和 X3 是疏水氨基酸而X1'和 X2'是非酸性氨基酸,一些经常使用的识别位点是 L-V-P-R-G-S,L-V-P-R-G-F,和 M-Y-P-R-G-N。在 X4-X3-P-R-G-X2'之间切割比在 X4-X3-P-K-L-X2'更有效。其他识别位点是 X2-R[K]-X1',这里 X2 或者 X1'是甘氨酸,例如 A-R-G 和G-K-A,这里切割发生在第二个残基后。
在凝血酶切割位点和 N 末端标签之间插入五个甘氨酸残基可改善切,通过这一"甘氨酸连接肽"只需较少酶量就可达到完全切割,而且也可以避免可能发生的错误切割。有效的消化缓冲液是 20mMTris-HCl 缓冲液,含 150mM 氯化钠,pH8.0。牛凝血酶可从切割产物中用 p-氨基琼脂糖亲和纯化,或者苯甲脒琼脂糖亲和纯化,或者肝素琼脂糖亲和纯化移去。
保质期 :
36个月
存 储 :
2~8℃